L’objectif de notre plateforme technique est de mettre à disposition notre expertise et nos outils moléculaires afin d’analyser la traduction et la stabilité de l’ARNm, ainsi que de générer des constructions lentivirales. Notre équipe propose les services suivants :

(i) Centrifugation sur gradient de densité. La centrifugation sur gradient de sucrose permet de séparer l’ARN libre de l’ARNm associé aux ribosomes.

(ii) Isolement / fractionnement des polysomes. L’analyse des ARNm liés aux ribosomes constitue une approche puissante pour étudier l’activité traductionnelle. Notre plateforme de fractionnement permet de purifier les ARNm activement traduits à partir d’une large gamme de tissus et de types cellulaires de mammifères, ainsi que d’autres organismes (par exemple : bactéries, levures, parasites). L’ARN polysomal peut ensuite être utilisé pour des applications en aval telles que le séquençage d’ARN ou l’analyse par RT-qPCR.

(iii) Tests de stabilité de l’ARN/immunoprécipitation de ribonucléoprotéines (RIP). Divers facteurs comme les ARN non codants et les protéines liant l’ARN (RBP), régulent le devenir de l’ARNm (traduction et dégradation) et jouent des rôles clés dans les processus physiologiques et pathologiques. Nous apportons un soutien pour la conception et la réalisation de tests de stabilité de l’ARN dans vos modèles in vitro. De plus, nous proposons une expertise en tests RIP afin d’identifier les cibles directes des ARNm des RBP.

(iv) Clonage moléculaire, constructions lentivirales. Vous souhaitez surexprimer ou inhiber un gène d’intérêt in vitro? Ou générer des lignées cellulaires stables? Nous offrons un accompagnement complet pour les stratégies de clonage et la production lentivirale. Nos ressources incluent des plasmides pour l’emballage lentiviral ainsi que des constructions permettant d’exprimer des régulateurs clés de la traduction et de la stabilité de l’ARNm (par exemple : RBP, eIF2α).

(v) Injection hydrodynamique de plasmides chez la souris. Pour les études ciblant le foie, nous proposons une expertise en injection hydrodynamique par la veine caudale afin de délivrer efficacement des plasmides aux hépatocytes in vivo.

(vi) Analyse, conseil, accompagnement et formation. Nous aidons également à la conception expérimentale, à l’analyse des données, et proposons des formations personnalisées ainsi que du conseil scientifique.

Contacts :

Dr. Noémie Legrand, Ph.D. (Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.) Scientific supervision. +33 (0)3 20 62 68 62.

Pr. Cyril Sobolewski, Ph.D (Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.): Academical supervision.

Mrs. Ophélie Bertin, MSc (Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.): Technical support.

Références:

Legrand et al, PLoS One, 2014.

Legrand et al, Nucleic Acids Research, 2015.

Legrand et al, Cancers, 2021.

Sobolewski et al, CMGH, 2021.

Sobolewski C, Dubuquoy L and Legrand N, Cancers, 2022.

Sobolewski et al, Cancers, 2022.